Protocolli di laboratorio
Analisi ARMS della mutazione T338I Protocollo segnalato da M. C. Rosatelli (Università di Cagliari).

Procedura:

Primers utilizzati:

7i5 20 pmol

7i3 20 pmol

ARMS T338I (mutato o normale ) 30 pmol

Sequenza primers ARMS T338I:

NORMALE 5' CAA AGG AAT CAT CCT CCG GAA AAT ATT GAC -3'

MUTATO 5' CAA AGG AAT CAT CCT CCG GAA AAT ATT GAT -3'

Condizioni di amplificazione:

denaturazione: 30 sec. 94°C

annealing: 30 sec. 60°C x 25 cicli

extension: 60 sec. 72°C

Migrazione in gel di agaroso 3%

banda amplificazione di controllo 410 bp (7i5 - 7i3)

banda specifica ARMS T338I 209 bp (primer ARMS T338I - 7i3)